Бензидиновый метод определения малых концентраций свободного гемоглобина

Одним из маркеров внутрисосудистого гемолиза, приводящего к нарушениям развитию ДВС-С1тндрома и острой почечной недостаточности, являстся повышение в крови содержания свободного гемоглобина (СГ). Для определения СГ широкое применение нашел бензидиноный метод, который основан на окислении бензидина СГ в присутствии перекиси водорода.

Цель работы. Модификация бензидинового метода определения СГ в крови с помощью спектрофотометра PVI25I С «СОЛАР».

Материал и методы исследования. Определение содержания СГ в сыворотке крови бензндиновым методом требует наличия: 1) 0,1% раствор бензидина (50 мг солянокислого бензидина растворяют в 50 мл ацетатного буфера (рН 4.6) при нагревании до 7(1-80 С° на водяной бане):

2) 0,3% раствор перекиси водорода (Н,0.1, 3) Референтный раствор гемоглобина «Гемоконт» (Россия): 4) Центрифуга шла ОПН-3; 5) Микропипетки; 6) Простые и центрифужные пробирки; 7) Спектрофотометр РVI251 С «СОЛАР» (Беларусь).

С целью оптимизации условий фотометрического определения СГ использовали спектрофотометр SPECORD-250 (1 срмания) I отовили компенсационный раствор (2 мл ацетатного буфера, 1 мл 11,0,. 1 мл раствора бензидина, 0,02 мл физ. раствора) и пробу (2 мл ацетатного буфера, 1 мл Н20„ 1 мл раствора бензидина. 0.02 мл рабочего раствора гемоглобина с концентрацией 0,1 г/л, приготовленного из «Гемоконт»), Длина волны, при которой отмечался максимум поглощения окрашенного продукта реакции. 600 нм, оптимальное время измерения максимальной величины оптической плотности 10 мин. Калибровочный график оказался линейной функцией в пределах измеряемых концентраций СГ 0,005-0,2 г/л .